Uporaba foges-proskauerjeve reakcije za mikrobiološko razlikovanje enterobacteriaceae

Pri diferencialnem odkrivanju Enterobacteriaceae in nekaterih Vibrio ima Foges-Proskauerjeva reakcija posebno mesto. Test temelji na sposobnosti bakterij, da fermentirajo glukozo in tvorijo acetoin.

Bistvo postopka testiranja

V mikrobiologiji se Foges-Proskauerjeva reakcija pogosto uporablja za razlikovanje med družino enterobakterij yersiniae (vključno s povzročitelji pseudotuberkuloze in enterokolitisa), E. coli, aerobi, ki tvorijo spore. Rezultat je viden z barvnim obarvanjem gojišča, ko so dodani določeni reagenti.

Ta test spada v serijo IMViC (kratica za Indol, Metil Red, Voges-Proskauer i Citrate), skupino identifikacijskih testov, ki vključujejo diferencialne opredelitve:

• z indolom, ki temelji na cepitvi triptofana v indol, uporabljen v prisotnosti Kovacsovega ali Ehrlichovega reagenta
• z uporabo metilrota ali metil rdečega, ki zazna določen pH kot posledico presnove glukoze;
• Foges-Proskauerjeva reakcija za odkrivanje acetilmetilkarbinola;
• uporaba citrata z sprememba barve zaradi alkalizacije medija.

Bistvo postopka je prikazati prisotnost bakterij, ki jih je mogoče diagnosticirati, z interakcijo acetoina, ki ga tvorijo, s kavstičnim kalijem ob prisotnosti kisika. Acetilmetilkarbinol se oksidira v diacetil, ki tvori spojino svetlo rdeče ali rožnate barve. povečajte občutljivost testa z vnosom alfa-naftola pred dodajanjem kavstične pepelike.

Preskusna nastavitev

Vzpostavitev Foges-Proskauerjeve reakcije vključuje predhodno gojenje mikroorganizmov. Čista kultura se poseje na Clarkovo diferencialno gojišče, katerega različica je Clarkov bujon (brez dodatka agar-agarja). Uporabi se lahko dostopno ali doma narejeno sredstvo. Sestava vsebuje:

• 5 g peptona;
• 5 g glukoze;
• 5 g dvovalentnega kalijevega fosfata;
• 1 l destilata.

Med testom se kultura s sterilno bakteriološko zanko inokulira v tekoče gojišče. Količina do 5 ml na epruveto in kontrola. Dvodnevna inkubacija pri 35-37 °C. Nato po korakih izvedite Foges-Proskauerjevo reakcijo:

1. 2,5 ml kulture na brozgi prenesite v sterilno epruveto.
2. Dodamo šest kapljic alfa-naftola (5-odstotna alkoholna raztopina).
3. Doda se raztopina kalijevega hidroksida v količini 0,1 ml ali dve kapljici 40 % raztopine.
4. Mešanje poteka z rahlim stresanjem epruvete.
5. Ocenite rezultat po 15 minutah od začetka poskusa.

Alternativna metoda za test je nočna inkubacija, katere čas se skrajša na 18 ur ali 24 ur. Poleg te metode se uporablja tudi ekspresni test: v 2 ml gojišča se dodaja lok kulture, inkubira se približno štiri ure, nato se dodajo reagenti v enakih količinah po 2-3 kapljice, premeša se in po desetih minutah se oceni rezultat.

Nadzor je eden od povzročiteljev Klebsiella pneumoniae, sev atcc 13883.

Vrednotenje rezultatov

Po preteku zahtevanega časa po dodajanju reagentov (5 do 15 minut) mora barva postati češnjevo rdeča v primeru močno pozitivne reakcije ter rdeča in rožnata v primeru šibke pozitivne reakcije. Nobena sprememba se ne zabeleži kot negativen rezultat.

Presežek kavstične pepelike v raztopini lahko povzroči simulirano pozitivno reakcijo z obarvanjem z bakrom. V tem primeru je treba zabeležiti negativen odziv testirane kolonije. Do obarvanja z bakrom pride tudi, če je ocena podana eno uro po dajanju reagentov.

Pri ocenjevanju rezultatov upoštevajte, da dolgotrajno gojenje preučevanih mikroorganizmov (več kot tri dni) povzroči zakisanje gojišča, kar lahko privede do napačnega rezultata študije. Reakcija je lahko šibko pozitivna ali lažno negativna.

Zahteve glede reagentov za test

Reagenti za Foges-Proskauerjevo reakcijo morajo izpolnjevati zahteve, kot so, kot pravilno Koncentracija, visoka čistost in stabilnost, dosežena z ustreznimi pogoji skladiščenja.

Predpakirani testni kompleti običajno vsebujejo reagente za 100 ali več aplikacij in so na voljo v plastičnih stekleničkah ali stekleničkah iz obarvanega stekla. Nadzorovana kakovost ustrezno dokumentacijo.